产品货号：
YTB4071
中文名称：
蛋白提取液(昆虫)
英文名称：
BalbLytic Insect Active Protein Extraction Reagent
产品规格：
100mL
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品是一种用于快速、高质量、高产量、高活性提取昆虫细胞如Sf 9和Sf 21等或昆虫组织的细胞浆蛋白、细胞核蛋白以及膜蛋白的昆虫活性蛋白抽提试剂。本产品对于细胞浆的蛋白的抽提效果优于细胞核和细胞膜的蛋白。
本产品是一种含有特定的经过精心筛选以确保蛋白抽提效果良好的比较温和的非变性去垢剂(detergent)的缓冲液(含有130mM NaCl,25mM Tris-Cl,pH7.5)，既确保了蛋白能被高效抽提，又能确保提取获得的蛋白样品中蛋白或酶的活性能被很好地保留，便于进行后续的蛋白活性分析检测或进一步的纯化。
由于本产品能确保提取的蛋白样品的活性，所含的去垢剂比较温和，虽然对于膜蛋白也有很好的抽提效果，但对于一些难溶性蛋白的抽提效率相对较低。如果希望获得比较高的难溶性蛋白的得率，建议使用含有强去垢剂的适当抽提试剂。对于使用本产品抽提获得的蛋白溶液，如果希望去除其中的去垢剂，可以通过透析或超滤方法去除。
本产品能够快速、温和、有效地抽提昆虫细胞或组织的总蛋白，抽提的蛋白能较好地保持其原有的空间结构和生物学活性，可用于多种生物化学和细胞生物学用途。例如，带有His、GST、HA、Flag、Myc、V5等标签蛋白的分离纯化，免疫印迹(Western blot)、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)和ELISA等常规生化分析，luciferase、β-gal、alkaline phosphatase、chloramphenicol acetyltransferase (CAT)等报告基因酶活性检测，PKA、PKC和酪氨酸激酶(tyrosine kinase)等蛋白激酶活力的检测等方面的用途。
保存：4℃，有效期1年。
本产品是一种含有特定的经过精心筛选以确保蛋白抽提效果良好的比较温和的非变性去垢剂(detergent)的缓冲液(含有130mM NaCl,25mM Tris-Cl,pH7.5)，既确保了蛋白能被高效抽提，又能确保提取获得的蛋白样品中蛋白或酶的活性能被很好地保留，便于进行后续的蛋白活性分析检测或进一步的纯化。
由于本产品能确保提取的蛋白样品的活性，所含的去垢剂比较温和，虽然对于膜蛋白也有很好的抽提效果，但对于一些难溶性蛋白的抽提效率相对较低。如果希望获得比较高的难溶性蛋白的得率，建议使用含有强去垢剂的适当抽提试剂。对于使用本产品抽提获得的蛋白溶液，如果希望去除其中的去垢剂，可以通过透析或超滤方法去除。
本产品能够快速、温和、有效地抽提昆虫细胞或组织的总蛋白，抽提的蛋白能较好地保持其原有的空间结构和生物学活性，可用于多种生物化学和细胞生物学用途。例如，带有His、GST、HA、Flag、Myc、V5等标签蛋白的分离纯化，免疫印迹(Western blot)、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)和ELISA等常规生化分析，luciferase、β-gal、alkaline phosphatase、chloramphenicol acetyltransferase (CAT)等报告基因酶活性检测，PKA、PKC和酪氨酸激酶(tyrosine kinase)等蛋白激酶活力的检测等方面的用途。
| 组分 | 规格 |
| BalbLytic昆虫细胞活性蛋白抽提试剂 | 100mL |
| 说明书 | 1份 |
保存：4℃，有效期1年。
- 抽提蛋白样品的所有步骤都宜在冰上或4℃进行，以保证蛋白的活性。
- 可以根据需要在抽提试剂中添加适当的蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂等。例如总体效果比较理想的通用型蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(货号：YTB4015)，或者根据具体用途选择通用型蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(质谱兼容，货号：YTB4017)，或成本比较低的蛋白酶抑制剂100mM PMSF(货号：YT615)。如果无需检测磷酸化蛋白，也可以选不含磷酸酶抑制剂的蛋白酶抑制剂混合物。
- 可以考虑选购BalbZonase超级核酸酶(货号：YTB4421、YTB4423)，并添加到本产品中以降低抽提产物的粘稠度。
- 抽提His标签重组蛋白如果后续用于镍柱等的纯化，通常应避免加入含EDTA的试剂。因为EDTA会破坏大多数的金属螯合纯化介质(例如Ni-NTA纯化介质)，但百奥莱博的His-tag Purification Resin (耐还原螯合型)(货号：YT616、YT046)可与EDTA兼容，因而在抽提试剂中含有EDTA仍然可用于含有His标签的蛋白纯化。
- 溶液的准备
- 悬浮培养昆虫细胞的蛋白抽提
- 收集细胞：对细胞进行计数，并确定总的细胞数。800g室温离心5min，弃上清。
- 洗涤细胞(可选做)：用PBS洗涤细胞，800g室温离心5min，弃上清。如有必要，可以再重复洗涤一次。
- 裂解细胞：弹击离心管底，使细胞沉淀适当分散开。每0.5～2×107个细胞加入冰浴预冷的1mL BalbLytic昆虫活性蛋白抽提试剂，用移液器吹打混匀，再以中速涡悬震荡约5秒后置于冰上孵育10min。如果希望获得更多的蛋白，或者对于一些较难裂解提取的蛋白，则需要额外的孵育时间以提高得率。额外的孵育时间，可能会增加蛋白得率。
- 12000～16000g (16000g更佳) 4℃离心15min。
- 将含有可溶性蛋白的上清转移到新的离心管中，立即用于后续分析检测，或者-20℃或-80℃保存备用。如有必要，可以考虑保留沉淀物用于后续分析。
- 收集细胞：对细胞进行计数，并确定总的细胞数。800g室温离心5min，弃上清。
- 贴壁培养昆虫细胞的蛋白抽提
- 洗涤细胞(可选做)：吸除培养液，加入适量PBS，轻轻摇动，吸除PBS重复洗涤一次。如有必要，可以再重复洗涤一次。洗涤过程中应尽量避免贴壁细胞的脱落，如果发生细胞脱落，可以收集相应的培养液或PBS溶液，800g离心5min，以沉淀并收集脱落的细胞。
- 裂解细胞：吸净细胞培养液或洗涤液，参考表1，加入适量的BalbLytic昆虫活性蛋白抽提试剂，冰上孵育10min。冰上孵育期间，可以将培养器皿放置在水平或侧摆摇床上剧烈摇动、敲击细胞培养瓶细胞培养侧的外壁或用细胞刮刮下贴壁细胞。通常直接孵育5～6min后，昆虫细胞会逐渐出现从培养器皿表面脱落的现象。
表1.不同规格的细胞培养器皿中百奥莱博BalbLytic昆虫活性蛋白抽提试剂的用量表。Multiple Well Plates or Dishes Growth area (cm2)* Volume of Extraction Reagent (μl) 10-cm dish 55 500-1000 6-cm dish 21 200-400 6-well plate 9.5 100-200 12-well plate 3.8 50-100 24-well plate 1.9 25-50 48-well plate 0.95 12.5-25 96-well plate 0.32 5-10 - 用移液器将细胞抽提产物吹打悬起并转移到离心管中，12000～16000g (16000g更佳) 4℃离心15min。
- 将含有可溶性蛋白的上清转移到新的离心管中，立即用于后续分析检测，或者-20℃或-80℃保存备用。如有必要，可以考虑保留沉淀物用于后续分析。吸取上清时触及沉淀会导致抽提产物中含有更多的杂蛋白等。
- 洗涤细胞(可选做)：吸除培养液，加入适量PBS，轻轻摇动，吸除PBS重复洗涤一次。如有必要，可以再重复洗涤一次。洗涤过程中应尽量避免贴壁细胞的脱落，如果发生细胞脱落，可以收集相应的培养液或PBS溶液，800g离心5min，以沉淀并收集脱落的细胞。
- 可溶性蛋白组分目的蛋白非常少。
- 目的蛋白不易溶解，或形成包涵体。用SDS-PAGE上样缓冲液溶解沉淀，用SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色或Western blot检测目的蛋白是否在沉淀中。
- 目的蛋白未表达。优化表达条件，核对和检查表达体系。
- 目的蛋白与细胞膜结合在一起。尝试使用能更好抽提昆虫膜蛋白的去垢剂溶解沉淀。
- 目的蛋白不易溶解，或形成包涵体。用SDS-PAGE上样缓冲液溶解沉淀，用SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色或Western blot检测目的蛋白是否在沉淀中。
- 目的蛋白降解。
- 样品中含有较高水平蛋白酶。在抽提试剂中添加蛋白酶抑制剂。
- 目的蛋白在室温发生降解。所有裂解和抽提步骤都在冰上或4℃操作。
- 样品中含有较高水平蛋白酶。在抽提试剂中添加蛋白酶抑制剂。
- 细胞抽提物蛋白浓度太低或太高。
- 根据实际情况，适当调整抽提试剂的使用量。
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